1. Egyszerűsített módszer Purkinje-sejtek előállítására ember által indukált pluripotens őssejtekből(PubMed)
Szerző:Lauren M Watson 1, Maggie M K Wong 2, Jane Vowles 3, Sally A Cowley 3, Esther B E Becker 2
Absztrakt:A Purkinje-sejtek in vitro vizsgálatára szolgáló megbízható modell felállítása különösen fontos, tekintettel a kisagyi működésben és patológiában betöltött központi szerepükre. Az indukált pluripotens őssejt (iPSC) technológia közelmúltbeli fejlődése lehetőséget kínál több neuronális altípus létrehozására in vitro vizsgálatokhoz. Mindeddig azonban csak néhány tanulmány hozott Purkinje-sejteket humán pluripotens őssejtekből, és ezeknek a protokolloknak a többsége nehézkesnek bizonyult a szaporodás. Itt egy egyszerűsített módszert írunk le Purkinje-sejtek reprodukálható előállítására humán iPSC-kből. 21 napos kezelés után olyan faktorokkal, amelyeket úgy választottak ki, hogy utánozzák az isthmiás szervező-inzulin önindukciós tulajdonságait, a fibroblaszt növekedési faktor 2 (FGF2) és a transzformáló növekedési faktor β (TGFβ)-receptor blokkoló SB431542-hiPSC-k képződése indukálható. En1-pozitív cerebelláris progenitorok akár 90%-os hatékonysággal. A differenciálódás 35. napjára sikerült azonosítani a két kisagyi csírazónát, a rombusz ajakot (Atoh1-pozitív) és a kamrai zónát (Ptf1a-pozitív) reprezentáló sejtek alpopulációit, amelyekből az utóbbi Purkinje sejt progenitorra pozitív sejteket eredményez. -specifikus markerek, köztük Lhx5, Kirrel2, Olig2 és Skor2. Ezeknek a kisagyi progenitoroknak az egér kisagysejtekkel való disszociációját és együttes tenyésztését követően további érést figyeltek meg, és a humán sejtek 10%-a festődött pozitívan a Purkinje sejtmarker calbindinre a differenciálódás 70. napjára. Ez a protokoll, amely magában foglalja a sejtek túlélésének és érésének fokozását, valamint a könnyebb kezelhetőséget javító módosításokat, a meglévő modellek hozzáférhetőbbé tételét szolgálja, hogy lehetővé tegye a terület jövőbeli fejlődését.
2. A Purkinje-sejtek dendrit-arborja megváltozott a leopárdgekkó farokregenerálódása következtében (PubMed)
Szerző:Stefanie S Bradley 1, Erika Howe 2, Craig D C Bailey 1, Matthew K Vickaryous 1
Absztrakt :A kisagy Purkinje sejtjei a dendritek összetett, fásított elrendezésével rendelkeznek, és az idegrendszer legkülönlegesebb sejttípusai közé tartoznak. Bár a Purkinje-sejtek neuromorfológiáját jól leírták egyes emlősök és teleost halak esetében, a legtöbb gerinces esetében kevésbé ismertek. Itt módosított Golgi-Cox módszerrel vizsgáltuk a leopárd gekkó, Eublepharis macularius gyík Purkinje sejtjeinek neuromorfológiáját. Sholl és Branch Structure Analysis segítségével arra törekedtünk, hogy megvizsgáljuk, hogy a gekkó Purkinje sejtek neuromorfológiája megváltozott-e a farok elvesztésére és regenerációjára válaszul. A farokvesztés egy kifejlesztett mechanizmus, amelyet a gekkók általában a ragadozók elől való menekülésre használnak. A farok elvesztése jelentős és hirtelen változást jelent a testhosszban és tömegben, amely csak részben tér vissza a farok regenerálódásával. Azt jósoltuk, hogy a farok elvesztése és regenerációja számszerűsíthető változást indukál a Purkinje sejt dendrit arborizációjában. A Sholl analízis adatainak utólagos összehasonlítása azt mutatta, hogy a regenerált farkú gekkók dendritátmérője és a dendritmetszéspontok száma jelentős változást mutat a párhuzamos rostszinapszisok helyzetének megfelelő régiókban. Azt javasoljuk, hogy a gekkó Purkinje sejtekben megfigyelt neuromorfológiai változások a farok újranövekedésére adott kompenzációs választ jelentenek, és talán szerepet játszanak a motoros tanulásban.
